【評測】細胞凍存液種類(干細胞凍存價格)
原標題：【評測】細胞凍存液種類
目前，細胞凍存最常用的技術是液氮冷凍保存法，主要采用加適量保護劑的緩慢冷凍法凍存細胞。細胞在不加任何保護劑的情況下直接冷凍，細胞內外的水分會很快形成冰晶，從而引起一系列不良反應。如細胞脫水使局部電解質濃度增高，pH值改變，部分蛋白質由于上述原因而變性，引起細胞內部空間結構紊亂，溶酶體膜由此遭到損傷而釋放出溶酶體酶，使細胞內結構成分造成破壞，線粒體腫脹，功能丟失，并造成能量代謝障礙。胞膜上的類脂蛋白復合體也易破壞引起細胞膜通透性的改變，使細胞內容物丟失。如果細胞內冰晶形成較多，隨冷凍溫度的降低，冰晶體積膨脹造成細胞核DNA空間構型發生不可逆的損傷，而致細胞死亡。
因此，細胞冷凍技術的關鍵是盡可能地減少細胞內水分，減少細胞內冰晶的形成。 通常采用甘油或二甲基亞砜（DMSO）作保護劑，這兩種物質分子量小，溶解度大，易穿透細胞，可以使冰點下降，提高細胞膜對水的通透性，且對細胞無明顯毒性。慢速冷凍方法又可使細胞內的水分滲出細胞外，減少胞內形成冰結晶的機會，從而減少冰晶對細胞的損傷。
BUT，對于藥用級、或者免疫細胞等特殊場合的研究中，采用甘油或二甲基亞砜（DMSO）作保護劑可能任然不能使用條件：
無血清細胞凍存液，通用于人和各種動物細胞株。特別配方（主要成分為DMSO和氨基酸）具有有效提高細胞凍存活率和復蘇活力。不含動物來源性蛋白，能減少各類病毒、霉菌和支原體等的污染，確保凍存細胞安全。既適用于一般培養細胞的凍存，也適用于無血清培養細胞和蛋白表達細胞的凍存。
特點
·不含動物源成分，病毒、霉菌和支原體等污染可能性低，各批產品之間有更高的產品質量一致性。
·成分明確，無批次差異。
·可直接存放于-80℃冰箱凍存，無需經過費時的程序降溫過程（省時、省力、省錢）。
獨特配方有效提高細胞凍存存活率及復蘇率
即用型，無需現配，即開即用
通用型，適用于凍存各種細胞系，原代細胞
可微量，原位凍存，例如雜交瘤細胞的凍存，省時高效
存儲條件
儲存于4℃以下,質量保障期從產品的生產日期起，為期兩年。3個月以上沒有使用凍存液計劃時，盡可能-20℃冷凍保存。為避免重復凍融過程可能導致的凍存液品質下降和性能降低，推薦將產品分裝成小管后，再存放于4℃以下或-20℃冰箱凍存。
凍存細胞復蘇步驟：
1、 從冰箱中取出凍存的細胞，立即置于37℃水浴槽中快速解凍。
2、 待凍存管中的細胞混合液完全融化后，立即加入1ml細胞培養基于凍存管中與細胞混合，將其中的混合液移至含有約5ml該細胞培養基的離心管中，1000rmp離心5分鐘，收集凍存細胞沉淀，移去上清液（注意勿將細胞沉淀倒掉）。
3、 加入適量的新鮮培養基，使用移液管緩緩加入細胞沉淀中，輕柔混勻，將混勻好的細胞移至事先準備好的培養容器中。
4、 鏡檢觀察，待細胞狀態恢復后可進行其他研究或者培養處理。
原位復蘇方式：
1、從冰箱取出凍存培養板，立即放入37℃水浴槽中快速解凍。
2、待凍存的細胞懸液完全融化后，輕輕吸去細胞凍存液，按照常規換液操作加入新鮮培養基繼續進行培養。
細胞冷凍保存方法
凍存管凍存方式：
1、按照常用方法收集懸浮細胞或貼壁細胞于試管中。
2、按照培養細胞密度和所用細胞凍存管的尺寸計算所需凍存細胞數。（參考：5×105至5×106cells/ml）。
3、取相當于所需細胞數的細胞懸浮液量，置于離心管中，離心收集培養細胞（參考離心條件：1,000~2,000 rpm，4℃，3~5 min）。移去離心管中的上清液。
4、加入適量無血清細胞凍存液于離心管中，使細胞濃度為5×105至5×106 cells/ml。緩慢混合均勻，制成細胞混合液。
5、將離心管中的細胞混合液分裝于已標示的冷凍保存管中建議每管 1ml或1.5ml。。
6、直接將含細胞懸液的凍存管放入-80℃冰箱，冷凍保存。
原位凍存方式：
1、從培養狀態良好的細胞培養板中將培養基上清吸取干凈。
2、加入適量無血清細胞凍存液于培養孔板中，充分浸潤細胞。
3、蓋上蓋板，做好密封措施，防止染菌。
4、直接將含凍存液的細胞培養板放入-80℃冰箱，冷凍保存。
注意事項：
1. 凍存液在凍存細胞分裝后，應減少在外存放時間，盡快移入-80℃超低溫冰箱。
2. 選擇凍存處于對數生長期的細胞有助于提高復蘇細胞存活率。
3. 對于干細胞（ES細胞），原代細胞等凍存時，我們建議事先對所凍存的細胞進行至少為期一周的干產品試驗性細胞凍存培養，確認性能后在進行正式凍存。
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